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    我司點撥:關于細胞株的保存方法!!!
    發布時間:2020-05-28   點擊次數:141次

    1. 紫外消du30min后封閉紫外燈,敞開超凈臺正常作業狀況,用酒精消du操作者的雙手。


    2. 將所需的培育基,胰酶確保瓶身潔凈后放于作業臺面內,點燃酒精燈,將培育基和胰酶瓶口用酒精棉球擦洗后,再將瓶口對準在酒精燈上消du2-3次,旋開瓶蓋后再次分別消du瓶口和瓶蓋,分別放于酒精燈的兩側。特別是將培育基瓶放于斜架上,瓶口對準酒精燈,且放在間隔酒精燈zui近的位置,瓶蓋置于酒精燈的另一側。


    3. 將培育瓶瓶口在酒精燈上消du2-3次,旋開后分別再次消du瓶口和瓶蓋2-3次,蓋放于酒精燈右側后將培育瓶內的培育液懸空倒進污缸,在酒精燈消du2-3次瓶口,豎直放好。取1ml移液器快速移動在酒精燈上消du1-2次,然后再裝上槍頭汲取1.5ml胰酶液,懸空移入培育瓶內。


    4. 將培育使胰酶浸沒整個瓶壁的細胞層,計時約40s,立馬豎起對著燈火可觀察到細胞與細胞之間有zhen孔樣縫隙,并有1-2個細胞掉落,這時為胰酶消化的zui適時機。若看到成片的細胞從瓶壁掉落為胰酶消化過度;若看不到zhen孔樣縫隙和細胞掉落,則需持續消化,悄悄的敏捷平放培育瓶使胰酶浸沒細胞層1s后敏捷豎起對著燈火觀察細胞狀況,可反復幾回,直至出現zhen孔樣縫隙和1-2個細胞掉落的消化狀況。用移液器將胰酶吸凈。


    5. 汲取1ml細胞凍存液于培育瓶內,并用移液器汲取少量的培育基輕柔的反復沖洗培育瓶壁5-8次,使貼壁細胞徹底掉落于培育基內再悄悄吹打2-3次,使細胞盡可能處于單個懸浮狀況。


    6. 將1ml含有細胞的凍存液移入新的保種管內,擰緊瓶蓋,做好試驗符號。


    7. 將培育基瓶口和瓶蓋消du2-3次后擰緊,平息酒精燈,整理試驗臺面,取出試驗試劑及污缸等,封閉超凈作業臺。


    8. 將保種管先放于4℃冰箱 30min后拿出放置-20℃冰箱過夜,次日再放于-80℃的冰箱內3-4天,zui后存放于-196℃的液氮灌內長時間保存。

        
    注此進程也可簡化因實際操作進程中經歷所得:步驟7結束后將保種管用干脫脂棉包裹后膠帶封好直接放于-80℃冰箱內4-5天,即可放于液氮灌保存。但-80℃冰箱也可保存細胞株2-3月。

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